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污水处理技术

LR ENVIRONMENT

随着社会经济的高速发展,我国的工业化程度得到极大提高,但伴随着经济发展而出现的环境问题也日益严重。目前城市生活污水处理已在工艺上取得成熟技术并得到应用,但工业废水特别是含高浓度硫酸盐和重金属离子


液体培养法

液体培养SRB,首先排除培养基内的空气,可以采用高纯氮气吹脱培养基内的空气以及使培养基加热的方法,然后接入适量菌液,在适宜的温度下静置培养。若在培养基上方覆盖一层灭过菌的液体石蜡效果更佳。

固体培养法

⑴稀释摇管法

稀释摇管法是稀释倒平板法的一种变通形式,先将一系列盛有无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化并保持在50℃左右,将已稀释成不同梯度的菌液加入到这些已熔化好的琼脂试管中,迅速充分混匀。待凝后,在琼脂柱表面倒一层灭菌的液体石蜡和固体石蜡的混合物,使培养基尽量隔绝空气。培养后,菌落形成在琼脂柱的中间。

困难之处在于菌落的挑取,首先需用一只灭菌针将覆盖的石蜡盖取出,然后再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间,吹入无菌无氧气体,将琼脂柱吸出,放在培养皿中,最后用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察并转移菌落。

该法的不足之处是观察与挑取菌落比较困难,但在缺乏专业设备的条件下,此法仍是一种方便有效地进行厌氧微生物分离、纯化和培养的低成该方法。

⑵叠皿夹层法

叠皿夹层法实质是将菌夹在上下两层培养基之间,使其造成一个相对无氧的环境,从而使SRB能在夹缝中生长。

具体做法是将已经富集好的菌液采用无菌操作技术稀释成不同浓度。将含有质量分数为2%琼脂的固体培养基熔化并保持在50℃左右,在无菌条件下,向培养皿(90mm×15mm)的皿盖中倒入约1/3高度的固体培养基,待其刚刚冷凝后,将不同浓度的稀释液吸取适量,快速涂布平板上,使稀释液渗透约30s后,在培养皿的中间位置倒入同种营养型固体培养基,直到将溢未溢的突起状态,随后迅速盖上皿盖并往下压,最终皿内不能有气泡。

去掉培养皿内外两层侧壁间多余的琼脂,并在其中灌入适量熔化的石蜡,使培养皿侧壁缝隙被石蜡密封,尽量不要留有气泡。培养一周后,在加有二价铁离子的平板中会长出黑色的SRB菌落,在酒精灯旁加热使固体石蜡熔化,由于上下两层培养基凝固时间不同,所以当移去内皿后,用镊子很容易将上层培养基揭起,从而露出下层培养基的菌落。当需要进行菌落挑取时,可以对其进行切块转移,放入液体培养基时捣碎即可。

该方法的优点是培养物均采用涂布或划线生长于营养琼脂夹层中,取菌落时可很方便地做到定点取菌,同时该方法不需要另外创建一个无氧环境,故省时、省力,具备了所有好氧、厌氧分离方法的优点。

⑶Hungate滚管技术

Hungate滚管技术是培养厌氧菌最佳的方法。滚管技术是美国微生物学家亨盖特于1950年首次提出并应用于瘤胃厌氧微生物研究的一种厌氧培养技术。这项技术又经历了几十年的不断改进,从而使亨盖特厌氧技术日趋完善,并逐渐发展成为研究厌氧微生物的一套完整技术。国内外很多专门做厌氧培养的实验室大都采用此技术。

Hungate滚管技术是指将适当稀释度的菌液,在无菌无氧条件下接入含有琼脂培养基的厌氧试管中,然后将其在滚管机或冰盘上均匀滚动,使含菌培养基均匀地凝固在试管内壁上。当琼脂绕管壁完全凝固后,琼脂试管即可垂直放置贮存,并可使少量的水分集中在底部,经过几天的培养后,就可见到厌氧管内固体培养基内部和表面有菌落出现。挑取菌落时也很方便,可以在酒精灯旁用自制的玻璃细管接种针挑取生长状态良好的菌落,快速接到液体培养基中富集培养。

Hungate滚管技术的优点在于,培养基可以在厌氧管内壁上形成一层均匀透明的薄层,同时菌落可以埋藏在培养基内部或生长在表面,同平板涂布法相比,与氧气接触的机会大大减少 [3]  。


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